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《儿童肺炎支原体呼吸道感染实验室诊断中国专家共识》解读

  导语

近日,中华医学会儿科学分会临床检验学组组织编写的《儿童肺炎支原体呼吸道感染实验室诊断中国专家共识》(以下简称“共识”)已经正式发布,其中阐述了肺炎支原体(MP)病原学特征及流行状况、MP检测的不同方法及特点、实验室检验质量控制、实验室诊断流程等。

该《共识》相较于之前发表的MP临床诊治共识,有几大亮点:

- 阐述了MP各类方法学在检验前、中、后质量控制的要点

- 采用分级推荐方式,对MP的方法学进行推荐

- 对检验后病原学和血清学结果的判读提出了分析建议

- 将不同检测方法的临床应用总结成实验室诊断流程图

MP概述

肺炎支原体(Mp)是一 种常见的病原微生物,主要引起人类呼吸道感染, 尤其以儿童和青年为主。Mp是儿童社区获得性肺炎(CAP)的重要病原体,可占 CAP 的 10%~30%,Mp流行时可增加 3~5倍。自2000 年起,大环内酯类耐药Mp在全球各地流行的证据越来越多,对临床抗菌治疗造成一定的影响。中国、日本等国家报道的部分地区Mp耐药率已达到90%~100%。重症Mp肺炎治疗挑战性大,需要早诊断、早治疗,实验室病原学诊断是Mp感染诊断的关键。

Mp 的检测方法主要分病原学检测和血清学检测两大类:

一、病原学检测

  二、血清学检测

与病原学检测方法比较,抗体产生有时间窗和个体差异,但抗体检测结果不受抗生素治疗的影响。

  检验前:样本采集、运输、保存规范

  检测中:方法学分级推荐

鉴于 Mp 独特的病原学特点、病原学检测的合格取材问题、血清学检测的时间窗和机体免疫条件影响以及不同检测方法的敏感度、特异度的不同,采用一种检测方法无法达到最终确诊,因此病原学与血清学联合诊断仍然是目前提倡的Mp感染诊断策略。

  检验后:结果解读

  共识一级推荐方法:SAT-RNA检测技术

SAT-RNA技术原理

  ① 反应在42℃恒温下进行,首先通过M-MLV反转录酶产生HBV RNA的一条带有T7启动子的双链DNA。

② 然后利用T7 RNA多聚酶从该DNA上扩增多个(100~1000个)RNA;

③ 带有荧光标记的探针和这些RNA特异结合,产生荧光。该荧光信号可由荧光检测仪器实时捕获,并根据信号强度进行定量;

④ 同时,每一个RNA再从反转录开始进入下一个扩增循环。

  SAT技术特点

- 专利样本保存技术,维持RNA稳定:样本保存液能在裂解病原体的同时有效保护RNA不被降解,可冷藏保存一周,保证检验前质量

- 特异性靶标捕获磁珠提取技术,特异性高:磁珠带有特异性MP-RNA捕获片段,最大限度去除反应抑制剂,提升扩增效率

- 实时荧光扩增检测,高效特异:采用分子信标探针,特异性高,扩增和检测在一个反应管内实时完成,不用开盖,操作简单,无需产物分析区,有效控制产物污染

- 配套自动化平台,操作简单,报告快速:已实现样本进,结果出的全自动检测,且能单个样本随时上机,1.5小时内完成检测,满足门急诊TAT要求

SAT技术获得MP临床共识推荐

儿童肺炎支原体诊治专家共识2015:

SAT能反映MP在人体内的生存情况,为疾病分期提供参考。其不受年龄、产生抗体的能力、病程早晚及用药等因素的影响,尤其在MP感染早期的检出率最高。

儿童肺炎支原体中西医结合诊治专家共识2017:

SAT在核酸检测技术中最敏感,可检测特异性RNA,阳性结果能反映MP在患者体内的存活情况。
 

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